Ministerio de Educación, Ciencia y Tecnología
Universidad Nacional de San Luis
FACULTAD DE QCA. BCA. Y FARMACIA

ANEXO II

PROGRAMA DEL CURSO: INGENIERIA GENETICA

DEPARTAMENTO DE:   BIOQUIMICA Y CS BIOLOGICAS
AREA: BiologiaAÑO: 2001 (Id: 616)
Estado: En tramite de Aprobación

 

I - OFERTA ACADÉMICA

CARRERAS PARA LAS QUE SE OFRECE EL MISMO CURSO

PLAN DE ESTUDIOS
ORD. Nº

CRÉDITO HORARIO

   

SEM.

TOTAL

LICENCIATURA EN BIOLOGIA MOLECULARninguna10120

II - EQUIPO DOCENTE

Funciones

Apellido y Nombre

Total hs en
este curso

Cargo y Dedic.

Carácter

Responsable

DNL  hs.PROFESOR TITULAR EXC.Efectivo
Jefe Trab. Prác.DNL120  hs.JEFE DE TRABAJOS PRAC. EXC.Interino

DNL: Docente no listado

III - CARACTERÍSTICAS DEL CURSO

CREDITO HORARIO SEMANAL
MODALIDAD
REGIMEN

Teórico/

Práctico

Teóricas

Prácticas de

Aula

Práct. de lab/ camp/

Resid/ PIP, etc.

1c
2 Hs.
2 Hs.
3 Hs.
3 Hs.
Asignatura
Otro: 
Duración: 12 semanas
Período del 12/03/01 al 21/06/01

IV.- FUNDAMENTACION

Ingeniería Genética es un curso destinado a los alumnos de quinto año de la carrera Licenciatura en Biología Molecular. El desarrollo alcanzado en el campo de esta disciplina durante los últimos años es muy importante. A lo largo del curso el alumno podrá descubrir los aspectos fundamentales en los que se basa este avance, obteniendo al mismo tiempo capacidades teórico-prácticas para la comprensión y el diseño de nuevas estrategias en el área de la investigación científica básica y aplicada. En este proceso, es indispensable la integración de los conocimientos adquiridos anteriormente. Se incentivará la activa participación de los alumnos, con el objetivo de lograr una actitud crítica frente a los nuevos conceptos tratando, al mismo tiempo, de incorporar hábitos indispensables para el buen desarrollo de etapas posteriores de la carrera.


V.- OBJETIVOS

- Capacitar al alumno para que evalúe y desarrolle diferentes estrategias de clonación de ácidos nucleicos.

- Capacitar al alumno en la comprensión de las metodologías de obtención de animales y plantas transgénicos y knock-out génicos.

- Capacitar al alumno para el procesamiento y evaluación de diseños y resultados experimentales, y para el análisis de trabajos publicados en revistas de divulgación científica, con una actitud crítica.

 


VI. - CONTENIDOS

Programa desarrollado.

TEMA 1.
Ácidos nucleicos. Extracción, purificación y cuantificación de moléculas de ADN y de ARN. Electroforesis en geles de agarosa. Purificación de fragmentos de ADN. Transferencia de ácidos nucleicos a membranas. Southern y Northern blot. Transformación de E. coli con moléculas de ADN. Diferentes técnicas utilizadas. Transformación de otros organismos. Mini-, midi-, y maxi- preparaciones de ADN plasmídico.

TEMA 2.
Manipulación enzimática del ADN. Endonucleasas de restricción. Digestión con endonucleasas de restricción. Mapeo de restricción de ADN (múltiple y parcial). Importancia de la eliminación de sistemas de restricción en bacterias.
Enzimas utilizadas para el marcado radiactivo de ácidos nucleicos.
Marcado y detección colorimétrica y quimioluminiscente de ácidos nucleicos.
Polimerasas, fosfatasas, quinasas, exonucleasas, ribonucleasas.

TEMA 3.
Vectores utilizados para el clonado de ácidos nucleicos. Plásmidos: propiedades básicas. Vectores de clonado basados en plásmidos de E. coli. Vectores de clonado basados en los bacteriófagos M13 y l. Vectores de clonado para plantas y para células animales.
Vectores de expresión en procariotas y eucariotas. Vectores de fusión.
Vectores que contienen genes reporteros: sistemas CAT, Luciferasa y b-galactosidasa.

TEMA 4.
Construcción de moléculas híbridas de ADN. Unión de moléculas de ADN. ADN ligasas. Relleno y eliminación de extremidades 5’. Defosforilación. Incorporación de sitios de clonado múltiples. Inserción de adaptadores. Colas de homopolímeros. Clonado de ADN en diferentes vectores. Subclonado de fragmentos de ADN.

TEMA 5.
Conversión de ARNm en ADN doble cadena.
Clonado de productos de PCR. Uso de las propiedades de la ADN topoisomerasa.
Mutagénesis de ADN clonado. Mutagénesis oligonucleótido dirigida.

TEMA 6.
Construcción y screening de bancos de ADN (ADN genómico, ADNc).
Construcción y screening de bancos de expresión de ADN.
Análisis de las secuencias de ADN obtenidas.
Sistema del doble híbrido en levaduras.

TEMA 7.
Transfección de ADN en células eucariótas. Diferentes técnicas: Fosfato de Calcio, DEAE-Dextran, electroporación, lípidos catiónicos, bombardeo e inyección de ADN.
Vectores de transferencia de ADN. Vectores virales: retrovirus, lentivirus, adenovirus, virus asociado a adenovirus. Vectores sintéticos asociados a ADN plasmídicos bacterianos: lípidos catiónicos, polímeros policatiónicos.

TEMA 8.
Gene targeting por recombinación homóloga.
Inactivación de genes (knock-out). Knock-out simple y doble. Sistema cre-lox.

TEMA 9.
Estrategias básicas de obtención de animales transgénicos. Aplicaciones prácticas. La generación de nuevos animales. Animales transgénicos para la producción de alimentos.

TEMA 10.
Estrategias básicas de obtención de plantas trangénicas. Aplicaciones prácticas. La generación de nuevas plantas y nuevos alimentos. La resistencia a herbicidas. Producción de diferentes moléculas en plantas transgénicas.


VII. - PLAN DE TRABAJOS PRÁCTICOS

TRABAJOS PRACTICOS.

1. Utilización de programas de búsqueda y comparación de secuencias de ácidos nucleicos.
2. Transformación de bacterias competentes (E. coli DH5a o BL21).
3. Cultivo bacteriano y minipreparación de ADN plasmídico con diferentes técnicas.
4. Análisis de restricción del ADN obtenido en el trabajo práctico anterior. Electroforesis de fragmentos de ADN en geles de agarosa.
5. Ensayo de búsqueda de patrones de corte de muestras sospechosas, asimilable a ensayo de DNA-fingerprinting.
6. Resolución de problemas: clonado de diferentes secuencias de ADN en diferentes vectores de uso común en el laboratorio.

Seminarios: se propondrán seminarios de discusión de trabajos de reciente publicación sobre el contenido correspondiente a los temas 7, 8, 9, y 10 del programa de estudios.


VIII - RÉGIMEN DE APROBACIÓN


La evaluación será continua, durante el desarrollo del curso. Se propone la posibilidad de Promoción sin examen, para lo cual se deberán cumplir los siguientes requisitos:
a. Se requiere una asistencia del 80 % a las clases teórico-prácticas.
b. Se realizará una evaluación continua del alumno a través de su participación en clase.
c. Presentación de informes escritos de las actividades prácticas desarrolladas.
d. Aprobación de los trabajos prácticos de laboratorio.
e. Aprobación de dos evaluaciones parciales, con carácter teórico-práctico.
f. Seminario bibliográfico: los estudiantes deberán exponer y aprobar un artículo de investigación, el cual se le entregará con anticipación para su preparación.
g. Presentación de un informe escrito individual sobre los contenidos teóricos correspondientes a los temas 7, 8, 9, y 10 del programa de estudios.
h. Presentación de un informe escrito grupal (de dos a cuatro alumnos) sobre los contenidos teóricos correspondientes a los temas 1, 2, 3, 4, 5, y 6 del programa de estudios.

Para alumnos regulares:
Se deben cumplir los requisitos anteriores, a excepción del g y h, con las siguientes modificaciones:
a. Asistencia requerida: 70 %.
b. Régimen de recuperaciones: de acuerdo a las ordenanzas vigentes.



IX.a - BIBLIOGRAFÍA BÁSICA


a. Molecular Biology of the cell. Third Edition. Garland Publishing, Inc. Bruce Alberts, Dennis Bray, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, James D. Watson.

b. Principles of Gene Manipulation. An introduction to the genetic engineering. R.W. Old and S.B. Primrose. Fifth Edition. Blackwell Science.

c. Gene cloning, an introduction. T.A. Brown 3rd Edition. Chapman and Hall.

d. Recombinant-DNA. 2nd Edition. J.D. Watson, M. Gilman, J. Wotkowski, and L. Zoller. Scientific American Books.

e. Molecular Biology of the Gene. 4th Edition. J.D. Watson.



IX b - BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA


a. Molecular Cloning, a laboratory manual. Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. Cold Spring Harbor Laboratory.

b. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley and Sons, Inc.



COMPLEMENTO DE DIVULGACION


OBJETIVOS DEL CURSO


- Capacitar al alumno para que evalúe y desarrolle diferentes estrategias de clonado de ácidos nucleicos.

- Capacitar al alumno en la compresión de las metodologías de obtención de animales y plantas transgénicos y knock-out génicos.

- Capacitar al alumno para el procesamiento y evaluación de diseños y resultados experimentales, y para el análisis de trabajos publicados en revistas de divulgación científica, con una actitud crítica.

 

 

PROGRAMA SINTETICO


TEMA 1.
ADN. Técnicas básicas de manipulación.
TEMA 2.
Manipulación enzimática de ácidos nucleicos.
TEMA 3.
Vectores utilizados para el clonado de ácidos nucleicos.
TEMA 4.
Construcción de moléculas híbridas de ADN. Clonado y subclonado de fragmentos de ADN.
TEMA 5.
Conversión de ARNm en ADN doble cadena. Clonado de productos de PCR. Mutagénesis de ADN clonado.
TEMA 6.
Construcción y screening de bancos de ADN. Construcción y screening de bancos de expresión de ADN.
TEMA 7.
Transfección de ADN en células eucariotas. Vectores de transferencia de ADN. Vectores virales. Vectores sintéticos.
TEMA 8.
Gene targeting por recombinación homóloga. Inactivación de genes.
TEMA 9.
Estrategias básicas de obtención de animales transgénicos y aplicaciones.
TEMA10.
Estrategias básicas de obtención de plantas transgénicas y aplicaciones.

 


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