Programa Desarrollado
TEMA 1. El problema del reconocimiento molecular subyacente en procesos bioquímicos, tales como: hormona-receptor, droga-receptor, enzima-sustrato, DNA-binding protein, etc. Procesos físico-químicos que determinan el reconocimiento molecular. Tipos de energías de interacción que participan en los procesos mencionados.
TEMA 2. Técnicas bioquímicas: técnicas de uso común del laboratorio bioquímico. Métodos separativos: filtración por tamices moleculares. Cromatografía por intercambio iónico. Cromatografía de afinidad: aplicación a la purificación de proteínas, ARN, anticuerpos y otros. Ultrafiltración. Solubilización y concentración de proteínas. Principios de separación y aplicaciones. SDS-Page. Separación de proteínas. Western e inmunoblotting para la identificación de proteínas. Inmunoprecipitación como método de análisis, identificación y purificación de proteínas. Ultracentrifugación: método de las velocidades y métodos del equilibrio de sedimentación. Aplicaciones a la purificación de plásmidos y DNA. Ventajas y desventajas de las diferentes metodologías. Aplicaciones.
TEMA 3. Receptores. Concepto de receptores. Propiedades que definen a un receptor biológico. El enfoque farmacológico vs. el enfoque bioquímico. Teoría de receptores. Curva de saturación. Gráfico de Scatchard. Interpretación de resultados experimentales. Estimación del Kd y N. Significado de los sitios de binding. Cinética del binding de receptores Curvas de asociación-disociacion: equilibrio de la interacción ligando-receptor. Estimación del Kd a partir del estudio cinético. Estudios de competencia: curvas de desplazamiento. Estimación de IC50 y Ki. Métodos de estudio y análisis de resultados.
TEMA 4. Receptores de membrana: aspectos prácticos del estudio de receptores de membrana. Métodos de preparación. Ensayo de binding. Métodos de separación del ligando \\\'libre\\\' del ligando \\\'unido\\\'. Solubilización de receptores. Aspectos experimentales. Caracterización bioquímica y molecular de los receptores. Análisis de casos. Resolución de problemas. Clonado de receptores: diferentes metodologias.
TEMA 5. Clasificación de los receptores sobre la base de su estructura y mecanismos de transducción. Mecanismos de transducción. Estructura de los receptores y mecanismos de transducción. Diferentes tipos de señales según el tipo de receptor. Receptores acoplados a canales iónicos. Ejemplos. Receptores acoplados a proteína G (GPCRs). Receptores con propiedades autocatalíticas: autofosforilación y fosforilación de proteínas.
TEMA 6. Modelos de receptor. Modelo de dos estados del receptor y modelo de tres estados. Mutantes CAM: mutantes constitutivamente activadas. Significado biológico de las mismas. Situaciones patológicas. Resolución de problemas. Regulación ´up´y ´down´ del ´numero de receptores. Reciclado de receptores vs. síntesis de novo y regulación de la síntesis. Desensibilización.
TEMA 7. Proteínas G. Diferentes tipos de proteína G y su acoplamiento. Estructura y rol de las diferentes subunidades. Biología Molecular de proteínas G. Homología entre las diferentes proteínas G. Identificación immunológica de las diferentes subunidades. Control dual de la adenilato cidasa. Acoplamiento a la adenilato cidasa vía la subunidad alfa s (estimulatoria) o alfa i (inhibitoria). Activación de proteína quinasa A (PKA).
TEMA 8. Equilibrio del acoplamiento receptor-proteína G. Efecto del sustrato. Estudios de reconstitución. Sitios regulatorios mediante toxina del cólera y toxina pertusis. La familia de las proteínas G. Proteínas G menores, transducinas, protooncogenes. Métodos de estudio y caracterización de la asociación receptor-proteina. Alteraciones en la expresión de proteínas G durante el desarrollo, transformación, diferenciación y estados patológicos.
TEMA 9. Mensajeros intracelulares: formas de acoplamiento, señalización intracelular y sus métodos de estudio. Ensayos in vitro o in vivo para el estudio de la respuesta biológica. Metabolismo de inositol fosfato como respuesta a la activación de receptores. Recambio de fosfolípidos. Proteínas G involucradas. Diferentes niveles de regulación. Activación de proteínas quinasas por DAG (diacilglicerol). Mobilización de iones Ca y activación de proteína quinasa C. Interacción entre mobilización de Ca y PI turnover. Propiedades de las diferentes proteínas quinasas y formas de estudio de las mismas.
TEMA 10. Receptores autocataliticos. Autofosforilación y proteínas tirosina quinasas. Mecanismos de fosforilación y defosforilación de proteínas, un delicado equilibrio. Activación de tirosina quinasas. Estructura del dominio catalítico. Proteínas tirosina fosfatasas. Cascadas de proteínas fosforiladas y activacion de MAP quinasas. Activación de la vía JAK-STAT y activación de genes tempranos. Relación con procesos de desarrollo y regulación génica. Interacción en la activación de diferentes proteínas quinasas.
TEMA 11. El NO como intermediario en la transducción de señales. Interrelación entre distintas células mediada por la formación de NO. Rol neuroprotector y neurodegenerativo. NO sintetasa. Diferentes isoformas. Modelo estructural, comparación con citocromo P450. Inhibidores de NOS. Guanilato ciclasa soluble. Secuestradores de NO.
TEMA 12. Procesos de reconocimiento celular. Moléculas de adhesión (CAM; NCAM; etc.). Selectinas. lntegrinas. Rol de las mismas en procesos biológicos.Importancia de la porción glicosídica de estas proteínas.
|