Ingeniería Genética es una asignatura destinada a los alumnos de la
carrera de Lic. en Biología Molecular. El desarrollo alcanzado en el
campo de la ingeniería genética durante los últimos años es muy
importante. A lo largo del curso el alumno podrá descubrir los
aspectos fundamentales en los que se basa este avance, obteniendo al
mismo tiempo capacidades teórico-prácticas para la comprensión y el
diseño de nuevas estrategias en el área de la investigación
científica básica y aplicada. En este proceso, es indispensable la
integración de los conocimientos adquiridos anteriormente, por lo
que se incentivará la activa participación de los alumnos, con el
objetivo de lograr una actitud crítica frente a los nuevos conceptos.

Programa desarrollado.

TEMA 1.
ADN. Extracción. Purificación. Cuantificación. Electroforesis.
Transferencia de ácidos nucleicos a membranas. Southern y Northern
blot.
Preparación de fragmentos. Mini-, midi- y maxi- preparaciones de
ADN plasmídico.
TEMA 2.
Manipulación enzimática del ADN. Endonucleasas de restricción.
Digestión con endonucleasas de restricción. Mapeo de restricción
de ADN (múltiple y parcial).
Enzimas utilizadas para modificar y para el marcado radiactivo de
ácidos nucleicos. Polimerasas, fosfatasas, quinasas, exonucleasas,
ribonucleasas, ligasas. Radioisótopos utilizados.
Marcado y detección colorimétrica y quimioluminiscente de probes
no-isotópicas.
TEMA 3.
Vectores utilizados para el clonado de ácidos nucleicos. Vectores
de clonado. Vectores de expresión en procariotas. Vectores de
expresión en eucariotas. Vectores de fusión. Vectores que contienen
genes reporter: sistemas CAT, Luciferasa y b-galactosidasa.
TEMA 4.
Construcción de moléculas híbridas de ADN. Rellenado de extremidades
5\'. Defosforilación. Inserción en vectores. Ligación. Transformación.
Subclonado de fragmentos de ADN.
TEMA 5.
Conversión de mARN en ADN doble cadena.
Clonado de productos de PCR.
Mutagénesis de ADN clonado. Mutagénesis oligonucleótido dirigida.
TEMA 6.
Construcción y screening de bancos de ADN (ADN genómico, cADN).
Construcción y screening de bancos de expresión de ADN.
Sistema del doble híbrido en levaduras.
TEMA 7.
Transfección de ADN en células eucarióticas. Diferentes técnicas:
Fosfato de Calcio, DEAE-Dextran, electroporación, lípidos catiónicos,
bombardeo e inyección de ADN.
Vectores de transferencia de ADN. Vectores virales: Retrovirus,
Lentivirus, Adenovirus, Virus asociado a Adenovirus. Vectores
sintéticos asociados a ADN plasmídicos bacterianos: lípidos
catiónicos, polímeros policatiónicos.
TEMA 8.
Gene targeting por recombinación homóloga. Inactivación de genes
(knock-out). Knock-out simple y doble. Sistema cre-lox.
TEMA 9.
Estrategias básicas de obtención de animales transgénicos.
Aplicaciones prácticas. Estrategias básicas de obtención de plantas
transgénicas. Aplicaciones prácticas.
TEMA 10.
Terapia génica. Terapia génica anticancerígena con genes suicidas.
Efecto de vecindad. Terapia génica de la mucoviscidosis. Terapia
génica y enfermedades cardiovasculares. Terapia génica de las
deficiencias inmunitarias.

TRABAJOS PRACTICOS.

1. Utilización de programas de búsqueda y comparación de secuencias
de ácidos nucleicos.
2. Preparación de un fragmento de ADN para clonado. Preparación del
plásmido pBluescript. Ligación.
3. Transformación de bacterias competentes (E.coli XL1-Blue). Cultivo
y minipreparación de ADN plasmídico. Análisis de restricción.
4. Subclonado de una secuencia de ADN en pCAT.
5. Transfección de ADN en células eucariotas. Preparación de
extractos proteicos y determinación de actividades enzimáticas (CAT
y control interno).
6. Resolución de problemas: clonado de diferentes secuencias de
ADN en diferentes vectores de uso común en el laboratorio.


Seminarios: se propondrán seminarios de discusión de trabajos de
reciente publicación sobre los temas desarrollados durante el curso.

REGIMEN DE EVALUACION.

La evaluación será continua, durante el desarrollo del curso. Se
propone la posibilidad de Promoción sin examen, para lo cual se
deben cumplir los siguientes requerimientos:
a. Se requiere una asistencia del 80% a las clases teórico-prácticas.
b. Se realizará una evaluación continua del alumno a través de su
participación en clase.
c. Presentación de informes escritos de las actividades prácticas
desarrolladas.
d. Aprobación de los trabajos prácticos de laboratorio.
e. Aprobación de tres evaluaciones parciales, con carácter
teórico-práctico.
f. Seminario bibliográfico: los estudiantes deberán exponer un
artículo de investigación, el cual se le entregará con anticipación
para su preparación.

Para alumnos regulares:
Se deben cumplir los requisitos anteriores, a excepción del f,
con las siguientes modificaciones:
a. Asistencia requerida 70%.
b. Régimen de recuperaciones: de acuerdo a las ordenanzas vigentes.